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细胞增殖活力IC50检测(MTT法)
英文: MTT Assay
编号: HY-SM-3005
品牌: 核宇生物
规格: 按项目
型号: 细胞生物学实验
价格:
1500.00
折扣: 请咨询
产品详情

细胞增殖活力IC50检测(MTT法)


细胞增殖活力检测介绍

MTT法,是一种检测细胞存活和生长增殖的方法。

检测原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO )能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长(或其他波长)处测定其光吸收值,在一定细胞数量范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强(如果是测药物毒性,则表示药物毒性越小)。

该方法灵敏度高、经济实用,已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模药物筛选、细胞毒性试验以及细胞放射敏感性测定等等。

细胞增殖检测(MTT检测)-P1.jpg

实验过程:

贴壁细胞

1、收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔,(边缘孔用无菌PBS填充)。

2、5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上,细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况

3、5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。

4、每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4h。若药物与MTT能够反应,可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液。

5、终止培养,小心吸去孔内培养液。

6、每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)

悬浮细胞

1、收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640(无血清)培养基40ul ;②加Actinomycin D(有毒性)10ul用培养液稀释 lmg/ml,需预试寻找最佳稀释度,1:10-1:20);③需检测物10ul;④细胞悬液50ul(即5×104cell/孔),共100ul加入到96孔板(边缘孔用无菌水填充)。每板设对照(加100m(储存液100 1640)。

2、置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察。

3、每孔加入10 ul MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT),继续培养4 h。(悬浮细胞推荐使用WST-1,培养4 h后可跳过步骤4),直接酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值)

4、离心(1000转x10min),小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD570nm(630nm校准)测量各孔的吸光值。

5、同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜),对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜),每组设定3复孔。

实验结果示例

细胞增殖检测(MTT检测)-P2.jpg

客户提供:

1、实验项目信息,包括细胞类型,处理药物和条件

2、实验结果特殊要求等。

我们的优势

1、提供各种实验材料和仪器,满足项目课题实验需要。

2、专业的操作人员。

3、高规格实验室。

4、数据结果交付周期快。

5、完善的服务体系,全程跟进,确保满意。

服务流程

1、提交项目课题相关需求和资料。

2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

4、双方均满意并达成一致,签订技术服务合同。

5、开展实验,按期完成合同规定的内容。

6、结题,提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。

咨询与订购

感谢您选择我们的服务,如果您有任何问题,请联系我们,我们将竭诚为您解答。

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