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基因沉默稳转细胞系构建
编号: HY-SC-0007
品牌: Genloci
规格:
价格:
25000.00
折扣: 请咨询
产品详情


基因沉默稳转细胞系构建


IOS技术原理介绍

基于Genloci独家专利IOS(Integration Operating System)重组技术,我们可为您提供目的基因的沉默稳定株系构建服务。我们利用IOS技术,将目的shRNA靶点定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中, 这些位点不仅安全(无基因),而且基因表达量更高(活跃表达位点),因此可以实现shRNA的高活性转录表达,进而对目的基因造成干扰,达到目的基因沉默的目的,并能长期稳定遗传,构建稳定细胞株系。实验周期只需(9-12周)。除此之外,我们也可以提供瞬时表达服务,构建瞬转株系。


技术原理

HY-SC-0007-1.jpg


实验过程:


客户提供

我们提供

周期

提供细胞株及培养条件

荧光定量PCR验证的单细胞克隆

9-12周

提供目的基因登录号

详细的项目报告

由单细胞生长的速度决定

HY-SC-0007-3.png

实验结果:

实验案例1

1. 构建3条shRNA载体,并筛选沉默效率最高的载体

2. 设计特异性的Oligo

3. 电转shRNA载体、Oligo和RP蛋白至HepG2细胞中

4. 药杀细胞池,获得稳转细胞池

5. 单克隆生长及Q-PCR验证(图1)

6. 获得 定沉默的HepG2细胞株

HY-SC-0007-4.jpg

1:Q-PCR检测不同克隆株目的基因表达情况


技术优势

目的基因沉默是研究基因功能常用的手段之一。Genloci拥有的独家 IOS 专利技术可以快速、高效的将 shRNA 整合到细胞的基因组中,实现目的基因的稳定沉默,该方法具有以下独特的优势:

1. shRNA 为定点整合,非随机整合

2. shRNA 为稳定遗传,传代过程中,不会丢失

3. 保证细胞传代过程中,基因的沉默效率保持一致,方便进行科学研究


我们的优势

1、提供各种实验材料和仪器,满足项目课题实验需要。

2、专业的操作人员。

3、高规格实验室。

4、数据结果交付周期快。

5、完善的服务体系,全程跟进,确保满意。


服务流程

1、提交项目课题相关需求和资料。

2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

4、双方均满意并达成一致,签订技术服务合同。

5、开展实验,按期完成合同规定的内容。

6、结题,提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。


常见问题解答:

Q-1:请问贵公司IOS技术做knock down的优势在哪里?

Q-1:shRNA整合效率高,筛选的阳性株系能够长期稳定遗传,试验周期短,大概为2个月。

Q-2:IOS技术做knock down跟慢病毒方法比有什么优势?

A-2:首先,RNAi的效率要比用慢病毒的方法高,并且能稳定遗传的代数比慢病毒的方法要多,保证最终提供knock down株系,基因效率下调60%以上。

Q-3:shRNA整合到基因组上大概什么位置,能否稳定遗传?

A-3:shRNA整合到目的基因附近,分析目的基因的表达,通过抗性筛选出来的阳性克隆都是可以长期稳定遗传的。

Q-4:IOS技术做基因的RNAi,能应用于植物吗?

Q-4:是可以的,已在烟草、水稻等模式植物中,得到验证。

Q-5:后期筛选鉴定都用什么技术呢?

A-5:我们默认为real time PCR验证,如果客户有需要,我们可以进行WB验证,可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。

Q-6:通常构建shRNA载体只构建一条吗?如果shRNA不工作,那重新构建会需要多长时间?

A-6:我们会同时设计合成3条shRNA,对shRNA的RNAi的效果做一个初步的验证,选用RNAi效果最好的一条做稳转株筛选,保证最后能拿到knockdown阳性克隆。


咨询与订购

感谢您选择我们的服务,如果您有任何问题,请联系我们,我们将竭诚为您解答和服务。

客服电话:19918901542(黄经理)

网站:http://www.heyubioscience.com   

邮箱:service@heyubioscience.com

QQ:3462773736


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