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基因过表达稳定细胞系构建
编号: HY-SC-0006
品牌: Genloci
规格:
价格:
22000.00
折扣: 请咨询
产品详情

基因过表达稳定细胞系构建


IOS技术原理介绍

基于Genloci独家专利IOS(Integration Operating System)重组技术,我们可为您提供目的基因的过表达稳定株系构建服务。我们利用IOS技术,将目的基因定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中, 这些位点不仅安全(无基因),而且基因表达量更高(活跃表达位点),因此可以实现目的基因过表达,并能长期稳定遗传。实验周期短(8-12周),整合效率高。基因整合不限长度,并可同时整合多个基因,实现多基因共表达。


技术原理

HY-SC-0006-1.jpg



实验过程:

客户提供

我们提供

周期

提供细胞株及培养条件

荧光定量PCR验证的单细胞克隆

9-12周

提供要过表达基因的cDNA

详细的项目报告

由单细胞生长的速度决定


HY-SC-0006-2.png


实验结果:

实验案例1

1、设计特异性的Oligo。

2、电转定点整合载体(包含RFP基因)、Oligo和RP蛋白至CHO-K1细胞中。

3、Puromycin/G418药杀细胞池,获得稳转细胞池。

4、单克隆生长及Q-PCR验证(图1)。

5、获得RFP蛋白稳定表达的CHO-K1纯克隆(图2)。


HY-SC-0006-3.jpg

1:Q-PCR检测不同克隆株RFP基因表达情况


HY-SC-0006-4.jpgHY-SC-0006-5.jpg

2:IOS技术构建RFP基因稳转株后显微镜观察结果


技术优势

目的基因过表达是研究基因功能常用的手段之一。Genloci拥有的独家IOS专利技术可以快速、高效的将目的基因整合到细胞的基因组中,该方法具有以下独特的优势:

1. 定点整合,非随机整合。

2. 稳定遗传,传代过程中,基因不会丢失。

3. 基因大小不影响整合的效率。

4. 定点整合的位点为高表达位点,基因的表达量高。


我们的优势

1、提供各种实验材料和仪器,满足项目课题实验需要。

2、专业的操作人员。

3、高规格实验室。

4、数据结果交付周期快。

5、完善的服务体系,全程跟进,确保满意。


服务流程

1、提交项目课题相关需求和资料。

2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

4、双方均满意并达成一致,签订技术服务合同。

5、开展实验,按期完成合同规定的内容。

6、结题,提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。


常见问题解答:

Q-1:此基因重组技术的专利是Genloci独家拥有吗?

A-1:Genloci独家拥有 10 项IOS技术专利保护, 由Genloci独家进行商业化开发。

Q-2:IOS 技术构建稳转细胞株相对于其他技术有什么优势?

A-2:IOS 技术不同于传统的任何技术,它是让目的基因定点整合,其它的技术都是随机整合;我们选择的位点是基因组上的高表达位点,所以可确保目的基因的高表达;整合后目的基因是稳定遗传;而其它的技术都是随机整合,且基因不稳定,传代几次后基因会丢失。

Q-3:这个技术做的稳转株能够稳定传代多少代?

A-3:只要细胞本身传代没问题,IOS 技术的稳转株至少可以保证稳定传代 20 代。

Q-4:IOS技术做过表达最低可以保证过表达多少倍?

A-4:Genloci专利的 IOS(Integration Operating System)重组技术可以实现目的基因过表达量最高达上百倍,具体目的基因过表达倍数由目的基因的本底表达量而定,相对于慢病毒包装所能达到的 5 倍左右,非常有优势。

Q-5:可以加标记基因吗?

A-5:可以根据客户的要求在目的基因N端或者 C-端添加各种蛋白标签或者 EGFP 等报告基因,并随目的基因一起稳定遗传,可与目的基因同一个启动子,也可以不同启动子。

Q-6:IOS 技术将目的基因整个到基因组上什么位置,可以是客户指定位置吗?

A-6:目的基因整合的位点是在我们开发 IOS 技术的时候前期筛选到的整合位点,不是随机的,这些位点安全且活跃性高,已经过验证。

Q-7:后期筛选鉴定都用什么技术呢?

A-7:后期单克隆筛选我们默认为 Real-time PCR 验证,如果客户有需要,我们可以进行 WB 验证,可以客户提供抗体也可以我们代买抗体。

Q-8:IOS专利技术是否有相关文献支持?

A-8:IOS技术一直应用于生物制药领域,用于科研方向才刚刚开始,所以暂时没有文章支持,但是,Genloci已经给超过50余位客户提供过过表达细胞株构建的服务。

Q-9:我想请教一下,后期筛选的时候用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有多少个孔是单个细胞?一般您在具体操作过程中一次要做多少块 96-孔板?

A-9:用有限稀释的方法一个 96-孔板大约能有 7-8 个克隆,依细胞性质而定,可以在实验之前先有限稀释摸索一下,这样再做单克隆筛选的时候比较清楚。通常实验一般会做 3-5 块板96-孔板,整合效率低时会多做几块,反之少做几块。


咨询与订购

感谢您选择我们的服务,如果您有任何问题,请联系我们,我们将竭诚为您解答和服务。

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